常见的pcr添加剂（pcr都加什么）

本篇文章给大家谈谈常见的pcr添加剂，以及pcr都加什么对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。

本文目录一览：

• 1、pcr中镁离子用什么稀释
• 2、做实时定量pcr需要哪些试剂?
• 3、做PCR实验要准备什么
• 4、常见的pcr抑制物不包括
• 5、PCR反应中各种添加剂的作用
• 6、pcr技术的四种原料是什么

pcr中镁离子用什么稀释

1、一般买来分装的PCR酶和BUFFER，如果用的次数不多，可以当时用，当时混合；如果经常使用，可以在使用前，先将BUFFER混合起来，即将镁离子、dNTP等混合起来，酶除外。酶当场加会比较好，可以将酶分装，减少冻融次数。

2、缓冲液有聚合酶需要的镁离子，还可以使反应体系处于酶反应时适合的PH，实际上就是给酶创造一个最适合的反应环境以使它的活性能达到最佳状态，如果你不加buffer，酶是没有活性的。

3、第二浓度不能太高以免抑制。缓冲液的成分最为复杂，除水外一般包括四个有效成分：缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；一价阳离子，一般***用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；二价阳离子，即镁离子。

4、PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用5mmol/L。

5、所以，如果你的PCR实验有问题，可以尝试改变不同的镁离子浓度，例如从0到0mM，中间间隔 0.5–1mM 就可以。值得注意的是，多次冻融循环能够导致氯化镁溶液（magnesium chloride）的浓度分层。

6、dNTP， 含镁离子的 PCR buffer，上游引物，下游引物，taq酶，模板DNA。

做实时定量pcr需要哪些试剂?

荧光定量pcr试剂：通常有用sybr green mix做的，但是这里建议你用evagreen做，灵敏度和平行性都要好于sybr green，并且如果你那是abi或者stratagene的pcr如果用sybr green还需要加一步rox很麻烦。

试剂包括：特异性 PCR 引物，新鲜提取备用的总 RNA。 使用的试剂盒有：用于合成 cDNA 第一链的罗氏试剂盒 Transcriptor FirstStrand cDNA Synthesis Kit，包含了 cDNA 反应所需要的所有实验组分以及相关的正对照反应组分。

需要1 缓冲液（分为含二价Mg和不含的，不含的就还要MgCl2）2 dNTP 3 引物 4 模板 5 酶 如果你买MIX的话，就只需要MIX，模板以及引物。

需要购买的 做pcr扩增用的试剂： PCRmix，或者酶，dntp等，电泳的试剂：胶，buffer，核酸染料，marker。如果做荧光定量或者测序，需要荧光修饰的引物，还得合成。耗材：pcr板，吸头，pcr管。还有很多别的东西。

普通PCR结果反映的其实是PCR的结果，而当PCR经过多伦循环到平台期后，很难反映原来模板的浓度；而实时定量PCR 反映的是PCR的过程，它起飞时间的Ct值可以精确反映模板的浓度。

高压过的超纯水，高压灭菌过的蓝色、白色和***枪头，100ul、500ul和1ml离心管，大量的话需要排管（12连管），放置离心管用的的架子（96孔板等）。PCR最好在冰上进行，所以准备冰盒。

做PCR实验要准备什么

参加PCR反应的物质主要有五种即：引物、酶、dNTP、模板和缓冲液。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。

Q-PCR 实验流程 实验前准备，每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开 15-20 分钟。2超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套，RNA 抽提需 带口罩。

pcr需要的原料有：物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA***的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液。

PCR管盒、PCR板、PCR板硅胶软盖、PCR管。。还有很多如图：***：//？keywords=PCR。　聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。

常见的pcr抑制物不包括

1、PCR抑制物：反转录反应和PCR反应均为酶促反应，任何可能抑制这些反应的物质都会影响检验的结果。

2、一个pcr反应体系中不包含的一项内容是：T7 RNA聚合酶。PCR反应体系主要由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。

3、pcr的过程不包括：转录。聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA***。

PCR反应中各种添加剂的作用

BUFFER 作用主要是稳定PCR过程中的PH。用于PCR的标准级冲液的主要成分，其中二价镁离子的存在与否至关重要。镁离子浓度可直接关系DNA聚合敌的活性和DNA双链的解链温度，因此对反应的特异性及产证有显著影响。

一些共溶剂和添加剂能够降低错误率，提高扩增效率。共溶剂有甲酰胺（25-10%，v/v）、二甲基亚砜（最高可到15%，v/v）及甘油（1%-10%，v/v）。添加剂包括氯化四甲铵、谷氨酸钾、硫酸铵。

促进核酸骨架的形成。Mgcl2和硫酸镁在pcr的作用主要是促进核酸骨架的形成，影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性，浓度过低影响扩增产量。

加入DMSO利于减少DNA的二级结构，使G、C含量高的模板易于完全变性，在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行。

作用：PCR缓冲液就是给PCR反应提供的一个最适酶催反应条件。例如缓冲液中的镁离子在酶催化过程中，结合到酶－底物结合体上，从而使催化反应的活化能更加降低。 使得反应能够进行。

pcr中引物的作用是作为DNA***开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行***。

pcr技术的四种原料是什么

1、pcr需要的原料有：物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA***的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液。

2、参加PCR反应的物质主要有五种即：引物、酶、dNTP、模板和缓冲液。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。

3、第一，PCR反应体系由引物、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。第二，PCR反应中，引物设计需特别注意，其他反应体系可以有商品化的产品出售购买。

4、、四种碱基的三磷酸腺苷（ATP、GTP、CTP、TTP），溶剂为DD水（纯度在99999%以上））、Mg离子（MgCl2）、扩增所需DNA模板、扩增序列两段的DNA引物（各约30BP）、DD水（调节浓度），以上所有原料都必须-20℃保存。

5、以靶DNA单链为模板，经反链杂交复性（退火）。在TaqDNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷（dNTP）为原料按5＇到3＇方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新***成双链。然后又开始第二次循环扩增。

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